Другие характеристики и преимущества данного изобретения становятся понятны из представленного ниже подробного описания. Мышей В6 помещают в клетки и кормят аб ЬЬйит при часовом цикле день-ночь. Инсулин представляет собой важный пептидный гормон, требуемый для поддержания гомеостаза глюкозы в крови у млекопитающих, включая человека, и других позвоночных. Например, последовательность нуклеиновой кислоты, содержащаяся в промоторе, полученном из определенного типа клеток, может быть связана с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, полученный из того же типа клеток, но который в природе не связан с последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащейся в промоторе. Способ выделения масляных телец описан в патенте США Парентеральные препаративные формы могут быть в ампулах, одноразовых шприцах или флаконах, содержащих одну или несколько доз, сделанных из стекла, пластика или других подходящих материалов. Стандартную РСК Нойоп е! Далее, молекулы мини-инсулина, которые могут применяться в соответствии с данным изобретением, включают те, которые представлены формулой. Атакама ек а1.
Дальнейшее получение инсулина потребует немедленного экстрагирования из биомассы сразу же после сбора, так как листья быстро высыхают при хранении. В еще одном предпочтительном варианте данного изобретения применяемым растением является сафлор, лен или ЛгаЬ1бор РНукюР , ; Согбоп-Катт е! Стандарт ЫН представляет собой стандарт рекомбинантного человеческого инсулина 0,5 мкг. Термин подходящий для экспрессии в клетке растения означает, что рекомбинантный вектор экспрессии содержит химерную последовательность нуклеиновой кислоты в соответствии с данным изобретением, связанную с генетическими элементами, требуемыми для достижения экспрессии в клетке семени. В этом случае термин мини-инсулин относится к полипептиду инсулина, который был модифицирован таким образом, что С-пептид был укорочен относительно его природной формы. В соответствии с данным изобретением вектор экспрессии также может содержать маркерный ген. Оек-В 30 инсулин представляет собой продукт, ожидаемый при коррекции созревания трипсина слияния Золотые поставщики - это компании, прошедшие предварительную проверку качества. Остается зрелый человеческий инсулин, белок из 51 аминокислоты, содержащий две полипептидные цепи, А 21 аминокислота и В 30 аминокислот , связанные двумя межцепочечными дисульфидными связями. Для достижения накопления полипептида инсулина в ЕВ-производной накопительной везикуле полипептид инсулина связан с полипептидом, который способен удерживать полипептид инсулина в ЕВпроизводной накопительной везикуле. Получение растений, содержащих семена, способные экспрессировать инсулин. Методы отбора гомозиготных растений хорошо известны специалистам в данной области техники. Результаты элюирования представлены на фиг. Человеческий инсулин получают с помощью множества различных методов. Опресненную фракцию затем снова замораживают и лиофилизируют в течение ночи для концентрации.
В предпочтительных вариантах множество трансформированных растений получают, выращивают и исследуют на присутствие желаемой химерной последовательности нуклеиновой кислоты, присутствие которой в предполагаемых трансформатах может быть протестировано, например, выращиванием в селективной среде, в которой применяют маркеры, устойчивые к гербицидам, путем непосредственного нанесения гербицида на растение или саузерн-блоттингом. В предпочтительном варианте ЕВ-производная накопительная везикула представляет собой масляное тельце, и полипептид инсулина связан с белком масляного тельца или его значительной частью, способной удерживать полипептид инсулина в ЕВ-производной накопительной везикуле. Таким образом, с точки зрения недостатков, имеющихся в методах рекомбинантного получения инсулина в растениях известного уровня техники, в настоящее время не ясно, когда и как синтетические возможности растений могут быть использованы для достижения коммерческого получения инсулина в растениях. Такие уровни экспрессии, которые по крайней мере в десять раз больше тех, которые были получены ранее, позволяют коммерческое производство инсулина в растениях.
Подходящее оборудование для измельчения включает коллоидные мельницы, дисковые мельницы, 1КА мельницы, гомогенизаторы промышленного масштаба и подобные. Последовательность К11рМ1 синтезируют из четырех частично перекрывающихся олигонуклеотидов, в которые введен кодон АгаЬ1йорк1к кЪаНапа, применяемый для повышения эффективности трансляции в системах экспрессии, основанных на растениях. После подтверждения целостности кДНК кодирования для слитого белка анализом последовательности плазмиды р8В, р8В и р8В трансформируют в штамм Е. Переносят ростки с корнями в стерилизован.
Ва а еб. В предпочтительном варианте данного изобретения последовательностью нуклеиновой кислоты, способной контролировать экспрессию в семенах растений, является предпочтительный для семян промотор, такой как промотор фазеолина. Подосадочные жидкости из реакций расщепления либо фильтруют через 0,2 мкм фильтры, либо концентрируют лиофилизацией на 8ауап! В предпочтительном варианте ЕВ-производная накопительная везикула представляет собой масляное тельце, и полипептид инсулина связан с белком масляного тельца или его значительной частью, способной удерживать полипептид инсулина в ЕВ-производной накопительной везикуле.
В соответствии с данным изобретением в особенно предпочтительном варианте применяют сафлор, АтаЫборкЫ или лен. Последовательности, кодирующие инсулин, которые могут применяться, включают кодирующие полипептидные цепи, представленные как 8Е0 Ш N Такое получение обычно включает виды бактерий ЕксНеНсЫа со11 в качестве промежуточного клонирующего хозяина. Расчетная последовательность аминокислот показана однобуквенным кодом. Предполагаемые трансформированные ростки, которые выживают после селекции, являются темно-зелеными и образуют значительное количество корней через дней при отдельном высаживании в среду для селекции II.
Все тесты на переносимость инсулина проводят с одинаковым интервалом каждый день Новые белки масляных телец также могут быть получены с применением известных последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих белки масляных телец, с применением, например, указанных здесь последовательностей белков масляных телец, кодирующих белки.
Инсулин, полученный в соответствии с данным изобретением, может вводиться любым желательным способом; однако парентеральный, пероральный, легочный, буккальный и назальный способы введения считаются наиболее часто применяемыми способами введения. Фармацевтические композиции инсулина могут быть получены из очищенного инсулина и такие композиции могут применяться для лечения диабета.
Для определения процента идентичности между двумя полипептидными последовательностями последовательности аминокислот двух таких последовательностей совмещают предпочтительно с применением алгоритма С1ик! Отсекают гипокотильные эксплантаты и инокулируют в полученном растворе клеток АдгоЬас! Термин масляное тельце или масляные тельца относится к любой органелле, накапливающей масло или жир, в клетке семени растения описаны, например, в Ниапд , Апп. Последовательность К11рМ1 синтезируют из четырех частично перекрывающихся олигонуклеотидов, в которые введен кодон АгаЫйорык ШаНаиа, применяемый для повышения эффективности трансляции в системах экспрессии, основанных на растениях. Сс11, Тис апб 0гдап СиНигс , но с модификациями и улучшениями как для трансформации , так и для применения фосфинотрицина в качестве выбранного маркера. Стандарт ЫН представляет собой стандарт рекомбинантного человеческого инсулина 0,5 мкг. Трансформация и выращивание рекомбинантной Е. Применяя эти последовательности нуклеиновых кислот, дополнительные новые последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие инсулин, могут быть легко идентифицированы с применением методик, известных специалистам в данной области техники. ААА Слитый белок Е. Семена растений могут быть измельчены с применением любого общепринятого способа, дающего значительное разрушение мембраны клетки и стенок клетки. Уровни глюкозы в плазме определяют автоматическим глюкометром ОпеТоиск И1! Во втором варианте будучи экспрессированным в мембране, окружающей внутриклеточный компартмент, такой как ЕК, полипептид инсулина будет связываться с масляным тельцем при разрушении клеток семени во время процесса измельчения. Химерные последовательности нуклеиновых кислот также включают последовательности нуклеиновых кислот, содержащие любые природные последовательности нуклеиновых кислот, связанные с любыми не существующими в природе последовательностями нуклеиновых кислот. Более того, количество биомассы, которую необходимо подвергнуть экстрагированию, ограничено из-за относительно низкого содержания воды в семенах растений. Обычно желательно высаживать множество трансгенных семян для получения трансгенных растений, каждое из которых содержит семена, содержащие химерную последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую инсулин.
В первом варианте полипептид инсулина будет изолирован в клетках масляных телец и, следовательно, очищаться совместно с масляными тельцами. Во втором варианте будучи экспрессированным в мембране, окружающей внутриклеточный компартмент, такой как ЕК, полипептид инсулина будет связываться с масляным тельцем при разрушении клеток семени во время процесса измельчения. Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая инсулин, может быть изменена для дальнейшего улучшения уровней экспрессии, например, оптимизацией последовательности нуклеиновой кислоты в соответствии с предпочтительным применением кодона для определенного типа клетки растения, которую выбирают для экспрессии полипептида инсулина, или изменением мотивов, которые известны как дестабилизирующие мРНК см. Такие уровни экспрессии, которые по крайней мере в десять раз больше тех, которые были получены ранее, позволяют коммерческое производство инсулина в растениях. Готов к отправке. Тесты на переносимость инсулина проводят по крайней мере в течение 2 дней с промежутками времени перед введением очередного теста. Фильтрованные реакционные смеси образцов могут быть нанесены на колонку непосредственно, но концентрированные образцы требуют удаления солей для эффективного связывания колонки. Высокая чистота dmt для продажи. The corridor was a political creation of the Great Game. Следовательно, молекулы мини-инсулина, которые могут применяться в соответствии с данным изобретением, включают. Выращивают аликвоту этой культуры, выращенной в течение ночи в 5 мл бульона Била с выбором для трансформации. Химерные последовательности нуклеиновых кислот также включают последовательности нуклеиновых кислот, содержащие любые природные последовательности нуклеиновых кислот, связанные с любыми не существующими в природе последовательностями нуклеиновых кислот. Методы отбора гомозиготных растений хорошо известны специалистам в данной области техники.
Термин последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая инсулин и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид инсулина, которые могут быть взаимозаменяемыми, относятся к любой и всем последовательностям нуклеиновых кислот, кодирующим полипептид инсулина, включая полипептиды инсулина, перечисленные в таблице 8ЕО Ш N , а также любой полипептид инсулина млекопитающего, и к любым последовательностям нуклеиновых кислот, которые кодируют проинсулин и препроинсулин. Гибридизируемая часть обычно содержит по крайней мере 15 например, 20, 25, 30, 40 или 50 нуклеотидов. Данное изобретение относится к методам генной инженерии растений и получения инсулина. В этом случае термин мини-инсулин относится к полипептиду инсулина, который был модифицирован таким образом, что С-пептид был укорочен относительно его природной формы.
Термин полипептид, способный сохранять полипептид инсулина в мембране, окружающей внутриклеточный компартмент в данном описании относится к любому полипептиду, который, будучи связанным с полипептидом инсулина, способен изолировать полипептид инсулина во внутриклеточной структуре, окруженной мембраной, и располагаться во внутриклеточном пространстве клетки растения, как определено плазматической мембраной клетки растения. Примером такого стабилизирующего полипептида является антитело с одной цепью со специфичностью к масляному тельцу. Получение растений, содержащих семена, способные экспрессировать инсулин. Последовательность К11рМ1 синтезируют из четырех частично перекрывающихся олигонуклеотидов, в которые введен кодон АгаЬ1йорк1к кЪаНапа, применяемый для повышения эффективности трансляции в системах экспрессии, основанных на растениях.
Более конкретно, данное изобретение относится к способам получения инсулина в семенах растений. Email Address:.
Новые белки масляных телец также могут быть получены с применением известных последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих белки масляных телец, с применением, например, указанных здесь последовательностей белков масляных телец, кодирующих белки. Термин также включает модифицированные или замещенные последовательности, включающие не существующие в природе мономеры или их части. Иммунореакционноспособная полоса соответствует полипептидной полосе, мигрируя при расчетном молекулярном весе слитого белка, как показано на фиг. Другие методы расчета процента совпадения между двумя аминокислотными последовательностями известны в данной области техники и включают, например, описанные Сап11о и Ыр!
купить закладки в сычевке | купить закладку мед в багдати | Меф сакар |
---|---|---|
19-7-2020 | 5813 | 15924 |
12-9-2008 | 15457 | 4139 |
30-5-2014 | 4387 | 19794 |
24-8-2003 | 7771 | 2300 |
29-11-2006 | 57714 | 98460 |
6-2-2017 | 15315 | 51574 |
Фармацевтические растворы или суспензии могут включать, например, стерильные разбавители, такие как, например, вода, лактоза, сахароза, дикальцийфосфат или карбоксиметилцеллюлоза. ВюйсЕноБ Бес; , терминатор для генов октопинсинтазы АдгоЬас1епит 1итеБас1еив или других подобных функциональных элементов. Отправить сообщение. Без Каблука дилатометр комплект dmt. Слитый белок элюируют из масляного тельца в подосадочную жидкость промыванием конечного жирного слоя 5 раз в мкл 20 мМ муравьиной кислоты, рН 4,1, при центрифугировании при д между каждой промывкой. Х 2 является одним из Рго, Акр, Ьук или 11е в положении 28 В-цепи;.
Химерная последовательность нуклеиновой кислоты дополнительно может содержать нуклеотидную последовательность, которая нацеливает последовательность нуклеиновой кислоты на эндомембранную систему сигнальный пептид. В предпочтительном варианте данного изобретения инсулин экспрессируется таким образом, который позволяет аккумулировать полипептид инсулина в мембране, окружающей внутриклеточный компартмент в клетках семян. Дальнейшие указания по культивированию тканей растений можно найти, например, в Р1ап! Химерные последовательности нуклеиновых кислот также могут содержать последовательности нуклеиновой кислоты одного и того же природного происхождения при условии, что они не связаны в природе.
Этот слитый белок начинается с 18 кДа олеозина из АгаЬ1йорк1к кйайапа, далее продолжается геном, кодирующим человеческий проинсулин ЬРГО. Обычно очищенный инсулин смешивают с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем в количествах, достаточных для оказания терапевтически полезного действия при отсутствии нежелательных побочных эффектов на пациента. Полипептиды, которые могут применяться в соответствии с данным изобретением для удержания полипептида инсулина в ЕВ, включают любые полипептиды, способные изолировать инсулин в ЕВ. По некоторым оценкам, сахарный диабет стоит на третьем месте среди самых частых причин смерти в промышленно развитых странах после сердечно-сосудистых заболеваний и рака ВагГоей, Н. Оек-В 30 инсулин представляет собой продукт, ожидаемый при коррекции созревания трипсина слияния Follow Following. Кроме того, по оценкам, количество пациентов, у которых диагностирован диабет, удвоится приблизительно до млн в ближайшие 25 лет К е1Й8еп, Т. Предпочтительные последовательности нуклеиновых кислот в соответствии с данным изобретением кодируют человеческий, бычий или свиной инсулин.
В данном описании проинсулин относится к полипептиду инсулина, который включает связывающий пептид или С-пептид, связывающий А и В цепи полипептида инсулина. Выращивают аликвоту этой культуры, выращенной в течение ночи в 5 мл бульона Била с выбором для трансформации. Маркерные гены, которые могут применяться в соответствии с данным изобретением, включают все гены, которые позволяют отличать трансформированные клетки от нетрансформированных клеток, включая все селектируемые и скринабельные маркерные гены. Се11 Си1! Среди векторов с системой репликации, функционирующей в Е. Два дополнительных промывания в фосфатном буфере без соли проводят поочередно с центрифугированием, как описано выше. Подходящее оборудование для измельчения включает коллоидные мельницы, дисковые мельницы, 1КА мельницы, гомогенизаторы промышленного масштаба и подобные. Следовательно, данное изобретение относится к способу получения семян растений, содержащих инсулин, который включает:. Термин полипептид, способный удерживать полипептид инсулина в ЕК или ЕК-производной накопительной везикуле относится к любому полипептиду, который, будучи связанным с полипептидом инсулина, способен изолировать полипептид инсулина либо в эндоплазматической сети, либо в накопительном компартменте, который является производным из эндоплазматической сети, таком как, например, масляное тельце, в клетке растения. В одном варианте антитело с одной цепью специфически связывается с олеозином, как описано в Л11шд-Мсс5 с1 а1. Дальнейшие указания по культивированию тканей растений можно найти, например, в Р1ап! Однако понятно, что эквивалентные ограничения могут быть достигнуты с применением альтернативных буферов, солей и температур. Термин масляное тельце или масляные тельца относится к любой органелле, накапливающей масло или жир, в клетке семени растения описаны, например, в Ниапд , Апп. Процедуру повторяют дважды перед промыванием и центрифугированием жирного слоя дважды в мкл 20 мМ Nа 2 НР0 4. Золотые поставщики - это компании, прошедшие предварительную проверку качества. Рекомбинантную плазмиду выделяют из 1 мл среды, выстаиваемой в течение ночи, согласно получению мини-препаратов 01адеп. Методы отбора гомозиготных растений хорошо известны специалистам в данной области техники. Поставщик Премиум членство для более высокого уровня поставщиков. В другом аспекте данное изобретение относится к растениям, способным давать семена, экспрессирующие инсулин. Стрелки указывают положение мигрирующего слитого полипептида. Ва а еб. Другие способы, которые могут применяться для выравнивания последовательностей, включают способ выравнивания Нидльмана и Вунша 1. После охлаждения на льду в течение 2 мин образец быстро центрифугируют. Примеры последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих инсулин, хорошо известны в данной области техники и обычно легко доступны из множества различных источников млекопитающих, включая человека Ве11, 0. Стандарт НШ представляет собой стандарт рекомбинантного человеческого инсулина 0,5 мкг. Образец охлаждают на льду в течение 2 мин и центрифугируют при д в течение 5 мин. Такие полипептиды могут быть синтезированы или получены из любых биологических источников.
Следовательно, возможность экономичного рентабельного производства человеческого инсулина в количествах, удовлетворяющих ожидаемую растущую мировую потребность в инсулине, крайне желательна. Конечный концентрированный обра. Стандартную РСК Ногкоп ек а1. Рекомбинантные векторы экспрессии, последовательности нуклеиновых кислот и химерные последовательности нуклеиновых кислот в соответствии с данным изобретением могут быть получены в соответствии с методиками, хорошо известными специалистам в области молекулярной биологии. Промотор фазеолина контролирует специфически временную и специфическую к тканям экспрессию трансгена во время развития семян.
Фильтр по поставщику Gold Supplier Золотые поставщики - это компании, прошедшие предварительную проверку качества. Собранные образцы концентрируют лиофилизацией и применяют для биотестирования инсулина, описанного в примере 6. QaraJeelga from the North East. Новые белки масляного тельца могут быть обнаружены, например, при получении масляных телец методики получения масляных телец см. В соответствии с данным изобретением в особенно предпочтительном варианте применяют последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антитело с одной цепью, связанной с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей лидерный пептид секреции дрожжей, как далее описано в примере 1. Результаты тестов переносимости инсулина представлены на фиг. Фабрика поставщиков dimethylthetin DMT для продажи химических промежуточных cas: Вас также заинтересуют dmt искусства dmt 1 цена dmt dmt цены 4 dmt 5 dmt dmt dmt индии dmt 1 dmt пара dmt электронная сигарета батареи dmt dmt производителей dmt продажи китай оптовая dmt электронная сигарета dmt комплект 4 dmt испаритель dmt нутрилон 3 цена zibo унитазы zibo shandong унитазы.
После подтверждения целостности кДНК кодирования для слитого белка анализом последовательности плазмиды р8В, р8В и р8В трансформируют в штамм Е. Процедуру повторяют дважды перед промыванием и центрифугированием жирного слоя дважды в мкл 20 мМ Nа 2 НР0 4. Купить закладку Химические реактивы Сантьяго де Куба. Применяемые носители включают воду, физиологический раствор, водную декстрозу, глицерин, гликоли, этанол и подобные, которые могут образовывать раствор или суспензию. После периода заражения удаляют эксплантаты из жидкой инокуляционной среды и наносят на стерильную фильтровальную бумагу. Растения выращивают до взрослого состояния и собирают смесь семян, трансформированных и нетрансформированных. Практически чистый инсулин может быть выделен из семян с помощью множества дополнительных методик очистки, таких как методики на основе центрифугирования; методики на основе отбора по размеру, включая, например, ультрафильтрацию через мембрану и ультрафильтрацию в поперечном потоке; и методики хроматографии, включая, например, ионообменную хроматографию, хроматографию с отбором по размеру, аффинную хроматографию, высокоэффективную жидкостную хроматографию ВЭЖХ , жидкостную экспрессхроматографию белком ЖХББ , хроматографию с гидрофобным взаимодействием, и подобные. Однодольные виды растений могут быть трансформированы с применением различных методик, включая бомбардировку частицами С1пк!
Применяемые здесь промоторы обычно являются известными в данной области техники промоторами и включают любой промотор растительного происхождения, способный контролировать экспрессию полипептидов в растениях. В предпочтительных вариантах множество трансформированных растений получают, выращивают и исследуют на присутствие желаемой химерной последовательности нуклеиновой кислоты, присутствие которой в предполагаемых трансформатах может быть протестировано, например, выращиванием в селективной среде, в которой применяют маркеры, устойчивые к гербицидам, путем непосредственного нанесения гербицида на растение или саузерн-блоттингом. Дважды промывают мл бактериальных клеток средой АВ и доводят до конечной плотности клеток 0,,5 0И Получение в семенах обеспечивает гибкость при хранении и транспортировке инсулина в виде сырья, так как инсулин сохраняет свою активность при экстрагировании из хранившихся семян. Ас1бк Кек. Обычно такие векторы клонирования содержат маркер, позволяющий отбор трансформированных клеток. Повторное растворение расщепленного продукта , очищенного ВЭЖХ, как описано выше, показано на фиг. Контроль включает ЫИ стандарт рекомбинантного человеческого инсулина и НРгоШ стандарт рекомбинантного человеческого проинсулина , выделенные в невосстанавливающих условиях. В соответствии с данным изобретением может быть выбран любой вид растения или клеток растения. The Corridor is a long and slender panhandle or salient , roughly miles km long and between 10 and 40 miles 16 and 64 km wide. Для достижения накопления полипептида инсулина в ЕВ-производной накопительной везикуле полипептид инсулина связан с полипептидом, который способен удерживать полипептид инсулина в ЕВпроизводной накопительной везикуле. После периода заражения удаляют эксплантаты из жидкой инокуляционной среды и наносят на стерильную фильтровальную бумагу. А является А-цепью человеческого инсулина, содержащей остатки аминокислот Сортировать по: Лучшее соответствие. Такие целевые сигналы могут быть ш у1уо отщеплены от последовательности инсулина, что обычно происходит когда применяется целевой сигнал апопласта, такой как сигнальная последовательность 8-белка, связанного с патогенезом табака РК-8 8утопк е! Выведенная последовательность аминокислот РК. В общем, промоторы, полученные из двудольных растений, применяют, если двудольное растение выбирают в соответствии с данным изобретением, а промотор однодольного растения используют, если выбирают однодольное растение.